荷兰小鼠的发情时间通常持续1至8小时，最长可达9小时。下午5点到5点之间交配更多。母亲的排卵是在发情结束时。在交配后，在阴道口处存在明胶样栓塞，其是雄性大鼠和前列腺的精囊的混合物。根据这种栓塞的存在与否，可以得出母亲是否已经交配的结论。但是，请注意栓塞有时可能会脱落。

有三种繁殖荷兰大鼠的方法：

繁殖近交系的方法，这是与1（）x l（）的兄弟姐妹交配的方法。这种交配方法不适合大批量生产。

大规模生产的繁殖方法，大量荷兰大鼠生产使用雄性小鼠，5-15只雌性大鼠的比例更适合交配（1至12是最合适的）。注意不要将超过2只荷兰公共老鼠放入同一个女性组，否则怀孕率不会降低，男性和女性之间也不会。可能会发生严重的叮咬。

男性和女性临时同居的方法，这种方法是将雄性和雌性大鼠保持在一起，然后让母亲的幼鼠断奶分开，然后让它们同居繁殖。

目前，大多数在中国繁殖实验动物和繁殖荷兰大鼠的单位都采用这种方法进行大规模生产。

荷兰妊娠期为65-72天，平均为68天。怀孕的数量是1个，大多数是6个和4-5个，但有些只是一个。

荷兰大鼠的哺乳期一般为夏季15天，冬季20天。由于荷兰小鼠怀孕时间较长且胎儿发育良好，新生幼犬可在出生后4-5天内进食，并且还吃母乳，因此幼犬的生长发育更加猖獗。一般来说，断奶时平均幼仔的重量可达100-180克。

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